氨基酸纸层析的原理是什么
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|2015-03-31 19:01
拥有生
|2015-03-31 19:06
氨基酸纸层析的原理是什么
纸层析法(paperchromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2~3cm的某一处，该点称为原点;然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数(Kd)不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值(rateofflow,Rf)来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点(又称为层析点)中心的距离(X)与原点至溶剂前沿的距离(Y)的比值:在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
相关知识
1.层析法（色谱法）：是一种物理的分离方法。它是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相为固定的（称为固定相），另一个相则流此固定相（称为流动相）并使各组分以不同速度移动，从而达分离。
2．几种常用的层析法
①吸附层析②离子交换层析③薄层层析④凝胶层析（凝胶过滤）⑤亲和层析
⑥分配层析（适于在水，有机溶剂中都可溶的混合物）
当把一种物质在两种不混溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀的分配。达到平衡时，这种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，即分配系数。
如果某一混全物的各组分在这两相中的分配系数有足够的差异，它们就可以被分离。
3．氨基酸的极性大小及各氨基酸结构
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